酶聯免疫吸附實驗是一種酶聯免疫技術。用于檢測包被于固相板孔中的待測抗原(或抗體)。即用酶標記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應在固相載體表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，最后通過酶作用于底物后顯色來判斷結果。顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

 

　　基本原理：

　　ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結合，此種結合不會改變抗體的免疫學特性，也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型，出現顏色反應。因此，可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應，顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定，這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。

 

　　特性：

　　用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩定；反應產物易于顯現；能商品化生產。如今應用較多的有辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應用*。

 

　　酶聯免疫吸附實驗的注意事項：

　　1、操作前應對實驗的物理參數有充分的了解，如環境溫度、反應孵育溫度和孵育時間、洗滌的次數等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

　　2、正確使用加樣器加樣器應垂直加入標本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過程中避免液體外濺，血清殘留在反應孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說明書一致，否則可導致結果錯誤，實驗重復性差。

　　3、手工洗板加洗液時沖擊力不要太大，洗滌次數不要超過說明書推薦的洗滌次數，洗液在反應孔內滯留的時間不宜太長。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問污染，導致假陰性或假陽性。

　　4、要保證加液量一致 我們在使用時感覺滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準，造成顯色不統一，判斷錯誤。

　　5、顯色液量不可過多 加樣的工作環境不能處于陽光直射的環境下，加顯色系統后要避光反應，顯色液量不能過多，以免顯色過強。