酶聯(lián)免疫試劑盒應(yīng)嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果。首先應(yīng)選取的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。所以酶聯(lián)免疫試劑盒試劑盒的購買，試劑質(zhì)量的保證以及實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)儀器的檢察都是很重要的。

　　1、標(biāo)本的采集及保存：

　　①、血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃經(jīng)過一夜夜后于1000x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　②、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8°C1000x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　③、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

　　④、樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10，000倍。

　　

　　2、試劑的準(zhǔn)備：

　　按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑，酶聯(lián)免疫試劑盒中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的，自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正，從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。

　　

　　3、加樣：

　　分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　

　　4、溫育：

　　用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　

　　5、洗滌：

　　小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　

　　6、顯色：

　　每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

　　

　　7、測(cè)定：

　　以空白空調(diào)零，450nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。