TB1感受態細胞

TB1感受態細胞

產品規格CAT#: BFNC86080-01(10×100ul)/BFNC86080-02(50×100ul)

TB1：                                                          100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質期)：                             -80℃（6個月）

基因型

F^– ara Δ(lac-proAB) rpsL (Str^R)[φ80 dlacΔ(lacZ)M15] thi hsdR

產品說明

TB1菌株源于JM 83，是JM 83 hsdR型菌株，只含有大腸桿菌RNA polymerase，缺少BL21 (DE3)菌株的T7 RNA polymerase，適合NEB公司的pMAL 系列質粒原核蛋白表達 (The pMAL vectors use the E. coli RNA polymerase)，不能用于pET系列質粒的表達，具有連霉素抗性。

青旗生物生產的TB1感受態細胞由特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率高達10⁸ cfu/μg DNA。

操作方法

1.TB1感受態細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質粒或連接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

TB1感受態細胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態細胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質粒時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質粒可相應減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導時，IPTG濃度可選(0.1-2mM均可)。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。