T0PI0F`化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

T0PI0F`化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86004-01(10×100ul)/BFNC86004-02(50×100ul)

T0PI0F`:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月）

基因型

F′{lacI^q Tn10 (Tet^R)} mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

產(chǎn)品說明

T0PI0F`菌株來源于T0PI0菌株。將F`{lacIq Tn10 (Tet^R)}因子轉(zhuǎn)入T0PI0菌株，即為T0PI0F`。該F`因子攜帶lacI^q 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動子下游基因的表達(dá)，從而可以用于一些表達(dá)毒性蛋白質(zhì)粒的擴(kuò)繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取?？捎糜跇?gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選（如用于藍(lán)白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)β-gal的表達(dá)）實(shí)驗(yàn)，具有四環(huán)素抗性。

青旗生物生產(chǎn)的T0PI0F`感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

*0F`化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

操作方法

1. T0PI0F`感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少13 h。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞適宜在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。